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      服務介紹

      DNA甲基化是表觀遺傳學(Epigenetics)的重要組成部分,在人的胚胎發育、基因表達調控、X染色體失活、衰老以及許多人類疾病(如發育畸形、癌癥、糖尿病和神經心理失調等)發生過程中發揮重要作用。DNA甲基化是在DNA甲基化轉移(DNMTs)的作用下使CpG二核苷酸5' 端的胞嘧啶轉變為5' 甲基胞嘧啶,在基因組的某些區域中,通常位于基因的啟動子區或是第一個外顯子區,CpG序列密度很高,可以達均值的5倍以上。
      常用的檢測目標片段甲基化的方法是BSP,這種檢測甲基化的方法可靠,且能確定目的片段中每一個CpG位點的甲基化程度,屬于定量檢測甲基化的方法,但是需要大量克隆,常做10個克隆的測序,一般對于甲基化程度低于10%的情況,克隆數量需要更多,費用和時間大大增加,所以BSP測序法有一定的局限性。本公司新推出一種將BSP和高通量測序結合起來的方法,具有一次性讀取數據量大的優點,從而能夠一次性更精確檢測目的片段中CpG位點的甲基化率,能精確測定1%的甲基化程度,即NGS甲基化檢測服務。

      主要流程

      基因組DNA提取 DNA亞硫酸氫鹽處理 PCR NGS測序 數據分析

      客戶提供

      • 提供樣品

        血液樣品:樣品為EDTA 抗凝或枸椽酸鈉抗凝,樣品量大于0.5 ml,樣品采集后于-20°C或-80°C保存;

        組織樣品:樣品可以為新鮮組織(最好-80°C保存)或石蠟包埋的組織,也可以是95%乙醇中固定的組織,組織量大于100 mg

      • 提供信息

        填寫官網www.wc929.com客戶專區下的下載中心中《基因甲基化位點檢測服務訂單》,務必提供詳細的基因信息(序列或NCBI 登錄號)。

      最終交付

      實驗報告、原始圖片、原始數據。

      聯系方式

      電話:021-57072091 郵箱: service2@sangon.com

      案例

      項目:

      客戶提供10個組織樣本,要求對其提供的*基因啟動子區域的一個片段進行甲基化定量檢測。

      方案:

      • 選擇B518251 柱式動物基因組 DNA 抽提試劑盒,進行基因組DNA的提取;
      • 對基因組DNA進行亞硫酸氫鹽處理;
      • 針對客戶提供的目的序列設計并合成引物;
      • 帶有index的引物和DNA樣本加入到配置好的體系中擴增;
      • 所有PCR產物等量混合;
      • 在IlluminaHiseq平臺測序進行高通量測序,獲得FastQ數據。

      結果:

      圖1甲基化檢測點狀圖

      每行代表一個樣本,每個原點代表一個位點的甲基化情況,黑色是甲基化,白色是未甲基化。第一行數字代表CpG位點位置,百分數代表對應CpG位點的甲基化率。

      圖2 甲基化檢測熱圖

      顏色深淺代表甲基化率高低,顏色越深甲基化程度越高,橫向文本指樣本,縱向代表CpG位點位置。

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